Дериватизация является одним из важнейших и постоянно развивающихся направлений аналитической химии. Необходимость дериватизации определяется применяемым для исследования инструментальным методом анализа. В газовой хроматографии ее применение связано с получением более летучих соединений, снижением полярности функциональных групп, и как следствие улучшение хроматографических свойств вещества, либо получения продуктов специфичных для определенного типа детекторов (ЭЗД, ТИД и.т.п.). Для жидкостной хроматографии с применением спектрофотометрических и флуориметрических детекторов дериватизация позволяет получать соединения, чувствительные к данному типу детекторов.
Handbook of Derivatives for Chromatography
K. Blau, G.S.King
1978 г.
Метилирование (салициловая кислота, ацетилсалициловая кислота, жирные кислоты, барбитураты).
Вариант 1. К сухому образцу прибавляют 2 мл ацетона, 2 мл метилиодида и 30-50 мг карбоната калия. Кипятят с обратным холодильником и хлоркальциевой трубкой при 60-70оС в течение 20-30 мин. Раствор доводят до 5 мл и 1 мкл вводят в колонку хроматографа.
Вариант 2. Вещество растворяют в 0,2 М спиртовом растворе тетраметиламмония гидроксида (1:5 вес/объем) и через 2 минуты вводят в ГЖХ (реакция протекает в инжекторе хроматографа).
Ацетилирование (классический
вариант).
20 мг вещества растворяют в 20 мл хлороформа и прибавляют 0,5-1 мл уксусного ангидрида в 1-5 мл уксусной кислоты. Реакция протекает при 50оС в течение 2-16 часов. Реагенты упаривают в вакууме, растворяют в 20 мл хлороформа и исследуют методом ГЖХ.
Ацетилирование уксусным
ангидридом и пиридином.
Сахара. Вещество растворяют в смеси уксусного ангидрида и пиридина (1:1), нагревают при 100оС в течение 20 мин. Реакционную смесь вводят в ГЖХ или упаривают в вакууме и реконструируют в этилацетате для анализа.
Парацетамол. К 50 мкг вещества прибавляют 5 мкл пиридина и 15 мкл уксусного ангидрида, встряхивают и греют при 45оС в течение 20 мин. 1-3 мкл смеси анализируют методом ГЖХ.
Перфторацильные производные.
Амин растворяют в 0,5 мл бензола, прибавляют 0,1 мл 0,05 М раствора триэтиламина в бензоле и 10 мкл соответствующего ангидрида (трифторуксусного или другого), нагревают при 50оС в течение 15 мин. Раствор встряхивают с 1 мл воды, затем с 1 мл 3 М раствора гидроксида аммония и далее исследуют ГХ/ЭЗД.
Mass Spectral and GC Data of Drugs, Poisons,
Pesticides, Pollutants and Their Metabolites
K. Pfleger, H.H.
Maurer, A. Weber
1992 г.
Ацетилирование.
40 мкл аликвоту экстракта упаривают до сухого остатка и затем ацетилируют 30 мин при 60оС с 40 мкл смеси уксусный ангидрид-пиридин (3:2). После выпаривания смеси реагентов, остаток растворяют в 40 мкл метанола.
Метилирование.
40 мкл аликвоту экстракта в метаноле метилируют 10 мин (для карбонильных кислот) и несколько часов (для фенольных соединений) при комнатной температуре свободным раствором диазометана в диэтиловом эфире (синтезированного в соответствии с Эйстертом и соавторами 1968 г). Этот раствор стабилен несколько месяцев, когда храниться в закрытом 10 мл флаконе при -20оС. После выпаривания раствора, остаток растворяют в 40 мкл метанола.
Триметилсилилирование.
40 мкл аликвоту экстракта упаривают до сухого остатка и затем выдерживают 30 мин при 60оС с 40 мкл MSTFA. 0,5-2 мкл смеси вводится в газовый хроматограф (при отсутствии в используемом шприце спиртов и воды).
Трифторацетилирование.
40 мкл аликвоту экстракта упаривают до сухого остатка и затем дериватизируют с 40 мкл трифторуксусного ангидрида и 40 мкл этилацетата в течение 15 мин при 60оС. После выпаривания дериватизационной смеси, остаток растворяют в 40 мкл этилацетата, не содержащего воды и спирта.
Пентафторпропионильные
производные.
40 мкл аликвоту экстракта упаривают до сухого остатка и затем дериватизируют с 40 мкл ангидрида пентафторпропионовой кислоты в течение 30 мин при 60оС. После выпаривания дериватизационной смеси, остаток растворяют в 40 мкл этилацетата, не содержащего воды и спирта.
Пентафторпропионильные и пентафторпропильные производные.
Сухой остаток дериватизируют со 100 мкл ангидрида пентафторпропионовой кислоты и 70 мкл пентафторпропанола в течение 30 мин при 60оС. Затем реагенты выпаривают в токе азота при 60оС. Остаток растворяют в 30 мкл этилацетата, не содержащего воды и спирта.
АНАЛИЗ НАРКОТИЧЕСКИХ СРЕДСТВ
С.К. Еремин, Б.Н. Изотов, Н.В. Веселовская
М.: "Мысль", 1993
Амфетамин, метамфетамин. К остатку прибавляют 100 мкл гептафтормаслянного ангидрида и нагревают при 80оС в течение 60 мин.
Каннабиноиды. К остатку прибавляют 50 мкл N,O-бис(триметилсилил)-трифторацетамида содержащего 1% триметилхлорсилана. Нагревают при 90оС в течение 1 часа. Смесь непосредственно вводят в колонку.
Морфин, кодеин. К остатку прибавляют 100 мкл смеси уксусного ангидрида с безводным пиридином (1:1) и выдерживают 15 мин при 60оС. Избыток реагентов выпаривают. Остаток растворяют в этилацетате, не содержащего воды и спирта.
Дериватизация в ГХ-МС анализе лекарственных и наркотических веществ, имеющих токсикологическое значение.
Материалы к семинару, Владимир, 2002 г.
Краснова Р.Р., Николаева Э.Г.
Силилирование.
Алкилирование/ацилирование.
К сухому остатку пробы добавляют 50 мкл ангидрида пентафторпропионовой кислоты и 25 мкл пентафторпропанола. Нагревают в течение 15 мин. при 90оС. Затем реагенты выпаривают. Остаток растворяют в 50 мкл этилацетата, вводят 1-2 мкл в хроматограф.
Ацетилирование (ацилирование).
К сухому остатку пробы в виале добавляют 50 мкл этилацетата и 50 мкл уксусного (трифторуксусного) ангидрида, герметично закрывают виалу, тщательно встряхивают. Нагревают при 60оС в течение 20 мин. Затем реагенты выпаривают при 50оС (для амфетаминов при комнатной температуре). Остаток растворяют в 50 мкл этилацетата, вводят 1-2 мкл в хроматограф.
Алкилирование.
К сухому остатку пробы добавляют 200 мкл смеси (1:1) диметилсульфоксида: 0,2 М раствора тетраметиламмония гидроксида в метаноле и 100 мкл соответствующего алкилиодида (BuI, PrI, EtI, MeI). Смесь выдерживают при комнатной температуре 4 мин, затем нагревают при 60оС в течение 4-6 мин. Смесь охлаждают, добавляют 3 мл гексана, встряхивают, добавляют 1 мл 0,1 н. раствора едкого калия и снова встряхивают. Центрифугируют, гексановый слой отделяют, концентрируют до 100 мкл и 1-2 мкл вводят в хроматограф.
Пробоподготовка в экологическом анализе
Ю.С. Другов, А.А. Родин
С.-П.:"Анатолия", 2002
(для ВЭЖХ/УФ)
Карбоновые кислоты.
Растворяют 10 мкмоль карбоновой кислоты, 20 мкмоль реагента (фенацил- или бензоилбромида) и 40 мкмоль N,N-диизопропилэтиламина в 1 мл диметилформамида. Нагревают раствор 1 час при 60оС. Образец может непосредственно вводиться в обращенно-фазную колонку.
2,4-Динитрофенилгидразоны
карбонильных соединений.
Растворяют 10 мкмоль образца в 0,5 мл метанола, подкисляют одной каплей конц. соляной кислоты. Растворяют 15 мкмоль 2,4-динитрофенилгидразина в 0,5 мл метанола. Смешивают два раствора и нагревают несколько минут до завершения реакции.
2,4-Динитрофенольные
производные аминов (первичных и вторичных).
К 0,2 мл 0,3% раствора 1-фтор-2,4-динитробензола в диоксане добавляют раствор образца в 1,5 мл 1% водного раствора тетрабората натрия. Нагревают раствор 25 мин при 60оС, добавляют 0,2 мл 2 М. раствора натриевой щелочи и выдерживают 15 мин. Охлаждают и встряхивают с 1 мл циклогексана. Циклогексан отделяют и промывают 0,1 М раствором карбоната натрия порциями по 2-3 мл. Органическая фаза может напрямую исследоваться на прямо-фазной колонке.