Дериватизация является одним из важнейших и постоянно развивающихся направлений аналитической химии. Необходимость дериватизации определяется применяемым для исследования инструментальным методом анализа. В газовой хроматографии ее применение связано с получением более летучих соединений, снижением полярности функциональных групп, и как следствие улучшение хроматографических свойств вещества, либо получения продуктов специфичных для определенного типа детекторов (ЭЗД, ТИД и.т.п.). Для жидкостной хроматографии с применением спектрофотометрических и флуориметрических детекторов дериватизация позволяет получать соединения, чувствительные к данному типу детекторов.

 

Handbook of Derivatives for Chromatography

K. Blau, G.S.King

London, Philadelphia, PA. Rheine

1978 г.

Метилирование (салициловая кислота, ацетилсалициловая кислота, жирные кислоты, барбитураты).

Вариант 1. К сухому образцу прибавляют 2 мл ацетона, 2 мл метилиодида и 30-50 мг карбоната калия. Кипятят с обратным холодильником и хлоркальциевой трубкой при 60-70оС в течение 20-30 мин. Раствор доводят до 5 мл и 1 мкл вводят в колонку хроматографа.

Вариант 2. Вещество растворяют в 0,2 М спиртовом растворе тетраметиламмония гидроксида (1:5 вес/объем) и через 2 минуты вводят в ГЖХ (реакция протекает в инжекторе хроматографа).

Ацетилирование (классический вариант).

20 мг вещества растворяют в 20 мл хлороформа и прибавляют 0,5-1 мл уксусного ангидрида в 1-5 мл уксусной кислоты. Реакция протекает при 50оС в течение 2-16 часов. Реагенты упаривают в вакууме, растворяют в 20 мл хлороформа и исследуют методом ГЖХ.

Ацетилирование уксусным ангидридом и пиридином.

Сахара. Вещество растворяют в смеси уксусного ангидрида и пиридина (1:1), нагревают при 100оС в течение 20 мин. Реакционную смесь вводят в ГЖХ или упаривают в вакууме и реконструируют в этилацетате для анализа.

Парацетамол. К 50 мкг вещества прибавляют 5 мкл пиридина и 15 мкл уксусного ангидрида, встряхивают и греют при 45оС в течение 20 мин. 1-3 мкл смеси анализируют методом ГЖХ.

Перфторацильные производные.

Амин растворяют в 0,5 мл бензола, прибавляют 0,1 мл 0,05 М раствора триэтиламина в бензоле и 10 мкл соответствующего ангидрида (трифторуксусного или другого), нагревают при 50оС в течение 15 мин. Раствор встряхивают с 1 мл воды, затем с 1 мл 3 М раствора гидроксида аммония и далее исследуют ГХ/ЭЗД.

 

Mass Spectral and GC Data of Drugs, Poisons, Pesticides, Pollutants and Their Metabolites

K. Pfleger, H.H. Maurer, A. Weber

Weiheim, N.Y., Basel, Cambridge

1992 г.

Ацетилирование.

40 мкл аликвоту экстракта упаривают до сухого остатка и затем ацетилируют 30 мин при 60оС с 40 мкл смеси уксусный ангидрид-пиридин (3:2). После выпаривания смеси реагентов, остаток растворяют в 40 мкл метанола.

Метилирование.

40 мкл аликвоту экстракта в метаноле метилируют 10 мин (для карбонильных кислот) и несколько часов (для фенольных соединений) при комнатной температуре свободным раствором диазометана в диэтиловом эфире (синтезированного в соответствии с Эйстертом и соавторами 1968 г). Этот раствор стабилен несколько месяцев, когда храниться в закрытом 10 мл флаконе при -20оС. После выпаривания раствора, остаток растворяют в 40 мкл метанола.

Триметилсилилирование.

40 мкл аликвоту экстракта упаривают до сухого остатка и затем выдерживают 30 мин при 60оС с 40 мкл MSTFA. 0,5-2 мкл смеси вводится в газовый хроматограф (при отсутствии в используемом шприце спиртов и воды).

Трифторацетилирование.

40 мкл аликвоту экстракта упаривают до сухого остатка и затем дериватизируют с 40 мкл трифторуксусного ангидрида и 40 мкл этилацетата в течение 15 мин при 60оС. После выпаривания дериватизационной смеси, остаток растворяют в 40 мкл этилацетата, не содержащего воды и спирта.

Пентафторпропионильные производные.

40 мкл аликвоту экстракта упаривают до сухого остатка и затем дериватизируют с 40 мкл ангидрида пентафторпропионовой кислоты в течение 30 мин при 60оС. После выпаривания дериватизационной смеси, остаток растворяют в 40 мкл этилацетата, не содержащего воды и спирта.

Пентафторпропионильные и пентафторпропильные производные.

Сухой остаток дериватизируют со 100 мкл ангидрида пентафторпропионовой кислоты и 70 мкл пентафторпропанола в течение 30 мин при 60оС. Затем реагенты выпаривают в токе азота при 60оС. Остаток растворяют в 30 мкл этилацетата, не содержащего воды и спирта.

 

АНАЛИЗ НАРКОТИЧЕСКИХ СРЕДСТВ

С.К. Еремин, Б.Н. Изотов, Н.В. Веселовская

М.: "Мысль", 1993

Амфетамин, метамфетамин. К остатку прибавляют 100 мкл гептафтормаслянного ангидрида и нагревают при 80оС в течение 60 мин.

Каннабиноиды. К остатку прибавляют 50 мкл N,O-бис(триметилсилил)-трифторацетамида содержащего 1% триметилхлорсилана. Нагревают при 90оС в течение 1 часа. Смесь непосредственно вводят в колонку.

Морфин, кодеин. К остатку прибавляют 100 мкл смеси уксусного ангидрида с безводным пиридином (1:1) и выдерживают 15 мин при 60оС. Избыток реагентов выпаривают. Остаток растворяют в этилацетате, не содержащего воды и спирта.

 

Дериватизация в ГХ-МС анализе лекарственных и наркотических веществ, имеющих токсикологическое значение.

Материалы к семинару, Владимир, 2002 г.

Краснова Р.Р., Николаева Э.Г.

Силилирование.

  1. К сухому остатку пробы в виале добавляют 30-50 мкл BSA, герметично закрывают виалу, тщательно встряхивают. Нагревают при 60оС в течение 5 мин. После охлаждения вводят 1-2 мкл в хроматограф.
  2. К сухому остатку пробы в виале добавляют 50 мкл сухого ацетонитрила и 50 мкл смеси BSTFA+1% TMCS, герметично закрывают виалу, тщательно встряхивают. Нагревают при 70оС в течение 20 мин. После охлаждения вводят 1-2 мкл в хроматограф.

Алкилирование/ацилирование.

К сухому остатку пробы добавляют 50 мкл ангидрида пентафторпропионовой кислоты и 25 мкл пентафторпропанола. Нагревают в течение 15 мин. при 90оС. Затем реагенты выпаривают. Остаток растворяют в 50 мкл этилацетата, вводят 1-2 мкл в хроматограф.

Ацетилирование (ацилирование).

К сухому остатку пробы в виале добавляют 50 мкл этилацетата и 50 мкл уксусного (трифторуксусного) ангидрида, герметично закрывают виалу, тщательно встряхивают. Нагревают при 60оС в течение 20 мин. Затем реагенты выпаривают при 50оС (для амфетаминов при комнатной температуре). Остаток растворяют в 50 мкл этилацетата, вводят 1-2 мкл в хроматограф.

Алкилирование.

К сухому остатку пробы добавляют 200 мкл смеси (1:1) диметилсульфоксида: 0,2 М раствора тетраметиламмония гидроксида в метаноле и 100 мкл соответствующего алкилиодида (BuI, PrI, EtI, MeI). Смесь выдерживают при комнатной температуре 4 мин, затем нагревают при 60оС в течение 4-6 мин. Смесь охлаждают, добавляют 3 мл гексана, встряхивают, добавляют 1 мл 0,1 н. раствора едкого калия и снова встряхивают. Центрифугируют, гексановый слой отделяют, концентрируют до 100 мкл и 1-2 мкл вводят в хроматограф.

 

 

Пробоподготовка в экологическом анализе

Ю.С. Другов, А.А. Родин

С.-П.:"Анатолия", 2002

(для ВЭЖХ/УФ)

Карбоновые кислоты.

Растворяют 10 мкмоль карбоновой кислоты, 20 мкмоль реагента (фенацил- или бензоилбромида) и 40 мкмоль N,N-диизопропилэтиламина в 1 мл диметилформамида. Нагревают раствор 1 час при 60оС. Образец может непосредственно вводиться в обращенно-фазную колонку.

2,4-Динитрофенилгидразоны карбонильных соединений.

Растворяют 10 мкмоль образца в 0,5 мл метанола, подкисляют одной каплей конц. соляной кислоты. Растворяют 15 мкмоль 2,4-динитрофенилгидразина в 0,5 мл метанола. Смешивают два раствора и нагревают несколько минут до завершения реакции.

2,4-Динитрофенольные производные аминов (первичных и вторичных).

К 0,2 мл 0,3% раствора 1-фтор-2,4-динитробензола в диоксане добавляют раствор образца в 1,5 мл 1% водного раствора тетрабората натрия. Нагревают раствор 25 мин при 60оС, добавляют 0,2 мл 2 М. раствора натриевой щелочи и выдерживают 15 мин. Охлаждают и встряхивают с 1 мл циклогексана. Циклогексан отделяют и промывают 0,1 М раствором карбоната натрия порциями по 2-3 мл. Органическая фаза может напрямую исследоваться на прямо-фазной колонке.



Hosted by uCoz