Актуальные вопросы судебно-химических и химико-токсикологических исследований. Материалы межрегиональной научно-практической конференции 6-7 октября 2011 г., Екатеринбург, 2012, с. 59-62.

 

Крохин И.П., Катаев С.С.

Совместное количественное определение амфетамина, метамфетамина, МДМА и МДПВ в крови

 

ГКУЗОТ «ПКБСМЭ», г. Пермь

Введение

В 2009-2010 годах Пермский край и всю территорию России захлестнула волна так называемых дизайнерских наркотиков, т.е. модификации наркотических средств и психотропных веществ. Одним из таких веществ является метилендиоксипировалерон (МДПВ).

МДПВ является производным катинона, и до внесения его в перечень наркотических средств, психотропных веществ и их прекурсоров, подлежащих контролю в Российской Федерации (18 ноября 2010) легально продавался на территории г. Перми под видом благовоний, солей для ванн, удобрений и т.д. МДПВ обладает выраженным психостимулирующим действием и продавался как легальная замена препаратов группы амфетамина. Но вскоре МДПВ стали применять опийные наркоманы, вводя его внутривенно. Ввиду высокой активности вещества и отсутствия опыта его внутривенного употребления стали отмечаться многочисленные случаи отравления МДПВ, в том числе и со смертельным исходом. Сложившаяся ситуация привела к необходимости количественного определения МДПВ в крови. Нами была разработана методика совместного определения амфетамина, метамфетамина, МДМА и МДПВ в одной пробе образца.

Оборудование

Хроматограф Agilent 7820A, оснащенный капиллярной кварцевой колонкой НР-5MS длиной 30 м с внутренним диаметром 0,25 мм и толщиной пленки 0,25 мкм. Масс-селективный детектор Agilent 5975 (Agilent, США). Термоблок ПЭ-4030, одноканальный испаритель ПЭ-2300, микровстряхиватель ПЭ-2 (ОАО «Экрос», Россия), вакуумный коллектор (манифолд) на 12 позиций Visiprep^TM SPE (Supelco), насос низкого вакуума (AIR CADET, США), бытовая микроволновая печь Rolsen MS1770SA (Россия). Полуавтоматические пипетки-дозаторы, позволяющие отбирать объемы жидкостей 4-40, 40-200, 200-1000 мкл и 1-5 мл.

 

Материалы и методы исследования

Амфетамина сульфат (ГФ X, ФС 513), метамфетамина г/хл, МДМА г/хл, сибутрамин, МДПВ г/хл – подлинность и чистота установлена методами ГХ/МС и ИК-спектрометрии.

Все используемые растворители и реактивы имели чистоту х.ч. Патроны для ТФЭ SampliQ EVIDEX (200 мг/3 мл). Пробы крови до исследования хранились при + 4^оС.

Пробоподготовка: Во флакон вносили 0,5 мл крови, прибавляли по 20 мкл растворов внутренних стандартов (спиртовые растворы N-этилбензиламина – 0,01 мг/мл, сибутрамина гидрохлорида – 0,05 мг/мл), 2 мл 1/15М фосфатного буфера (рН 6,0). Флакон плотно укупоривали и помещали в ультразвуковую баню на 5 минут. Содержимое флакона центрифугировали при 3000 об/мин в течение 10 минут, центрифугат отделяли от осадка.

Процедура твердофазной экстракции (ТФЭ): Экстракция проводилась на патронах для ТФЭ SampliQ EVIDEX (200 мг/3 мл) со смешанной фазой. Кондиционирование сорбента проводили путем последовательного пропускания через картридж 2 мл 95% этанола и 2 мл 1/15М фосфатного буфера (рН 6,0). Далее загружали образец со скоростью 1 мл/мин. Промывку осуществляли последовательно: 1 мл 1/15М фосфатного буфера (рН 6,0), 1 мл 0,1М кислоты уксусной и 1 мл 10% этанола. Сушка патрона происходила под вакуумом в течение 10 минут. Очистка производилась двукратным пропусканием через сорбент 2 мл смеси н-гексан–этилацетат (3:1). Элюировали дважды по 2 мл смеси дихлорметан–изопропанол–25% аммиак (4:1:0,1), элюаты испаряли в токе азота при температуре не выше 40^оС.

Дериватизация: К сухому остатку прибавляли 40 мкл безводного пиридина и 60 мкл уксусного ангидрида (замывая стенки флакона), флакон плотно укупоривали и обрабатывали СВЧ-излучением мощностью 560 Вт в течение 5 минут. После охлаждения, флакон вскрывали и выпаривали избыток реагентов в токе азота при температуре не выше 40^оС.

Исследование образцов: Сухой остаток растворяли в 200 мкл этилацетата и последовательно вводили в испаритель хромато-масс-спектрометра с использованием устройства для автоматического ввода проб.

Режим работы автосамплера включал следующие операции: пять промывок шприца этанолом; пять промывок этилацетатом; одна промывка шприца раствором пробы; три прокачки раствором пробы перед вводом ее в хромато-масс-спектрометр; набор и ввод пробы; пять промывок шприца этанолом; пять промывок этилацетатом.

Режим работы газового хроматографа с масс-селективным детектором. Скорость потока газа-носителя (гелий) через колонку 1,5 мл/мин, режим работы split/splitless (деление потока 15:1, с задержкой включения 1 мин после ввода пробы). Температура испарителя хроматографа и интерфейса детектора задавалась 250 и 280^оС соответственно. Температура колонки: начальная 70^оС в течение 2 мин и прогрев до 280^оС со скоростью программирования 20 град/мин, выдержка при конечной температуре 8 мин. Напряжение на умножителе масс-селективного детектора устанавливали на 200В выше величины автоматической настройки детектора. Режим работы масс-селективного детектора (селективные ионный мониторинг) приведен в таблице 1.

Таблица 1. Режим работы масс-селективного детектора

* – подчеркнуты ионы, по площади которых строилась калибровка;

** - внутренний стандарт для амфетамина, метамфетамина, МДМА;

*** - внутренний стандарт для МДПВ.

 

Калибровочный график строили методом внутреннего стандарта. В пробы крови 0,5 мл добавляли амфетамин, метамфетамин, МДМА, МДПВ (в пересчете на основание) 10 нг, 50 нг, 100 нг, 500 нг, 1000 нг. Для каждой концентрации калибровочного графика проводили исследование двух параллельных проб крови.

Расчет концентрации в экспертных образцах крови проводили по формуле:

где Cx – концентрация вещества в крови, мг/л;

Q – количество, полученное по графику, нг;

a – объем крови, взятый на исследование, мл.

 

Обсуждение результатов

По данным ГКУЗОТ «Пермское краевое бюро судебно-медицинской экспертизы» за 2010 год при судебно-химическом и химико-токсикологическом исследованиях биологических объектов от трупов лиц молодого возраста, умерших скоропостижно в 17 случаях был обнаружен метилендиоксипировалерон (МДПВ). Из них в 8 случаях употребление МДПВ был признан первопричиной наступления смерти, то есть является основополагающим в причине наступления смерти (основным судебно-медицинским диагнозом). В 5 случаях смерть молодых людей наступила от других причин, при этом наличие МДПВ оценивалось экспертами в качестве сопутствующей и/или фоновой патологии. В таблице 2 приведена связь концентрации МДПВ в крови с обстоятельствами смерти.

Таблица 2. Связь концентрации МДПВ в крови с обстоятельствами смерти

Обстоятельства смерти	Случаев	Случаев, %	Средняя концентрация МДПВ в крови, мг/л	Разброс концентраций МДПВ в крови, мг/л
Суицид, травма	5	29	0,648	0,334 – 1,098
Быстро наступившая смерть (до суток)	5	29	0,369	0,210 – 0,523
Отложенная (более суток)	6	35	-	н.о.

 

У 9 человек смерть наступила в медучреждениях в период от нескольких часов до 9 суток. В случаях смерти в ЛПУ свыше суток в крови, органах и биожидкостях МДПВ выявлен не был. Факт употребления был установлен по результатам исследования мочи, взятой для ХТА анализа при поступлении в стационар. В двух случаях исследования так же подтвердили прижизненное употребление умершими МДПВ^сс, так же найдены опиаты (морфин, кодеин).

Из 15 случаев обнаружения МДПВ при судебно-химическом исследовании МДПВ в крови при СХИ был обнаружен в семи случаях, концентрация составила от 0,21 до 1,10 мг/л. Низкие концентрации МДПВ в крови (0,21-0,28 мг/л) были зарегистрированы у лиц, умерших в больнице. Средние и высокие концентрации МДПВ в крови были обнаружены у лиц, умерших в результате травм (ЖД травма, падение с высоты), наибольшее содержание МДПВ в крови было зафиксировано у субъекта, вскрывшего себе вены (1,10 мг/л). Средний возраст лиц, у которых был обнаружен МДПВ, составил 30 лет, младшему – 20 лет, старшему – 35 лет; соотношение по полам м/ж составило 43/57%. Следует отметить, что смерть при употреблении МДПВ в случае его передозировки, может наступить в отложенные сроки – свыше двух дней после поступления в стационар (от 2 до 9 дней).

 

Примечание:

^сс Вывод сделан на основании результатов исследования волос.