Обнаружение каннабиноидов в моче методом тонкослойной
хроматографии.
Приведенный метод анализа является выдержкой из статьи журнала СМЭ, 2005, №2, с.35-38.
Пробоподготовка:
Во флакон помещают 1 мл метанола, прибавляют 2 мл исследуемой мочи, 150 мкл 50% раствора NaOH и перемешивают. Флакон плотно укупоривают и помещают в термоблок на 10 минут при 60оС. После охлаждения, флакон вскрывают, прибавляют 6 н. раствор НCl до рН 2-3 и дважды экстрагируют смесью н-гексан-этилацетат (7:1) порциями по 5 мл. Верхний слой отделяют, выпаривают досуха в токе теплого воздуха (40оС).
Тонкослойная хроматография:
Сухой остаток растворяют в 100 мкл хлороформа, замывали стенки флакона и количественно наносят в зону 1 хроматографической пластинки, предварительно активированной при 80оС в течение 30 мин. В качестве метчика в зону 2 наносят 2-3 мкл спиртового раствора 20 мкг/мл дельта-8-тетрагидроканнабиноловой кислоты. Система: гексан-изо-бутанол-ледянная уксусная кислота (90:9:1), время насыщения 25-30 минут. Пластинки “Сорбфил-ПТСХ-В” или “Сорбфил-ПТСХ-В-УФ”, пробег растворителя 8 см. После подсушивания пластинки на воздухе, проявляют последовательной обработкой реагентами А и после подсушивания реагентом Б.
Реагент А: 0,1 % раствор прочного синего ББ в 70% этиловом спирте.
Реагент Б: 10 % водный раствор NaOH.
Результаты исследования:
Положительный результат о наличие каннабиноидов дают при наличии розово-красного или красно-фиолетового пятна с hRf 36± 4, на уровне аналогично окрашенного пятна стандарта D8-тетрагидроканнабиноловой кислоты.
Чувствительность метода 20 нг D9-тетрагидроканнабиноловой кислоты на 1 мл мочи.
Рис.1. Хроматограмма проб с известной концентрацией ТГК кислоты в моче.
Рис.2. Хроматограмма реальных проб мочи.
Примечания: посуда для исследования силанизированная или мытая хромовой смесью. Если значения hRf значительно превышают приведенные, то можно для круглых камер сделать вставку из фильтровальной бумаги, либо заменить в системе гексан на гептан (так же можно использовать последний вариант, если температура в рабочем помещении более 25оС).
Катаев Сергей Сергеевич
E-mail: forenschemist@narod.ru
