Трамадол (трамадола гидрохлорид — транс-2-[(диметиламино)метил]-1-(3-метоксифенил)-циклогексан-1-ола гидрохлорид, CAS-36282-47-0) — синтетический анальгетик центрального действия — представляет собой рацемическую смесь (+) и (-) изомеров, различным образом участвующих в обезболивающем воздействии. Анальгетическое действие при внутривенном введении развивается быстро и продолжается 3-5 часов. Трамадол уступает по активности морфину, однако в терапевтических дозах практически не угнетает дыхания. В случае длительного применения возможна развитие лекарственной зависимости [3, 4]. Из организма выводится с мочой в течение 3 дней около 90% дозы, в том числе примерно 30% — в неизменном виде, метаболиты выводятся в виде конъюгатов (6).

Целью настоящей работы явилось совершенствование химико-токсикологического анализа трамадола в моче на основе метода тонкослойной хроматографии (ТСХ). Необходимость в этом возникла из потребностей практики в связи с участившимися случаями немедицинского применения трамадола. Опубликованные в литературе данные по исследованию трамадола в моче [I] могут быть дополнены результатами нашей работы, позволяющими включить его в общий ТСХ-скрининг и выполнить частный анализ.

Стандартные растворы. В качестве стандарта использовали водный раствор трамадола гидрохлорида с содержанием 2 мг/мл в пересчете на основание, который готовили разведением из ампулированного трамадола. Трамадол-основание выделяли экстракцией хлороформом при рН = 11,5 и упаривали досуха; экстракт затем использовали для приготовления метчика с концентрацией 1 мкг/мкл (хлороформ, этанол).

Экстракция. Экспериментально, на модельных опытах, подобраны условия экстракции трамадола из мочи. К интактной пробе мочи (10-50 мл) добавляли 20-100 мкл стандартного раствора трамадола, инкубировали в течение 12 часов при комнатной температуре, затем экстрагировали, используя методику, предложенную нами ранее для "изолирования" алкалоидов опия и производных 1,4-бензодиазепина [2], и известную методику экстракции наркотических и одурманивающих веществ при ненаправленном анализе [5] (трамадол обнаруживали во втором экстракте). Для частного исследования проводили прямую экстракцию из 10 мл мочи дважды равными порциями хлороформа при рН = 11,5. Полученные экстракты осушали безводным сульфатом натрия и упаривали досуха. Сухие остатки растворяли в 1 мл хлороформа (в 10 мл при ненаправленном анализе), делили на аликвоты, концентрировали и подвергали анализу.

Анализ. Для идентификации трамадола использовали метод тонкослойной хроматографии на отечественных пластинах "Сорбфил" марки "ПТСХ-П-А-УФ" и пластинах со слоем силикагеля КСК на стекле (Эстония) в четырех системах растворителей: I — толуол-ацетон-этанол-аммиак* (45:45:7,5:2,5);

II — этилацетат-метанол-аммиак (34:4:2); III — хлороформ-этилацетат-аммиак (60:40:1); IV — этилацетат-гексан-аммиак (50:15:2). Хроматографирование осуществляли восходящим методом в предварительно насыщенных камерах.

Для детектирования трамадола на хроматограммах использовали следующие реактивы: реактив Драгендорфа (в модификации Молдавера), растворы меди сульфата и калия йодида (последовательное проявление) и реактив Марки, применяемые в общем скрининге на вещества основного и слабоосновного характера после элюирования хроматограммы в системе I; реактивы Марки и Фреде при исследовании на группу опия после элюирования хроматограммы в системе II; 1% раствор нингидрина в концентрированной серной кислоте (при целенаправленном исследовании на трамадол) после элюирования хроматограммы в системах 111 или IV.

Чувствительность реакций обнаружения трамадола с различными реагентами определяли на пластинах "Сорбфил" и в слое силикагеля КСК, используя стандартный раствор трамадола в этаноле.

Результаты исследований апробировали на объектах, взятых у больных, получавших в стационаре соответствующее лечение, и лиц, задержанных за злоупотребление лекарственными препаратами. В зависимости от вида анализа пробы обрабатывались, как описано выше.

Результаты исследований представлены в таблице 1.

Таблица I. Результаты ТСХ-скрининга трамадола
 

Система раство-  рителей	Rf x 100		Проявители	Открываемый минимум, мкг		Окрашивание
	Сорбфил	КСК		Сорбфил	КСК
1	60	70	Реактив Драгендорфа (в модификации Молдавера)	1.0	1.0	оранжевое
11	53	56	0,03 М раствор меди сульфата с последующей обработкой 0,03 М раствором калия йодида	0,5	0,5	коричневое
III	25	30	Реактив Марки	3.0	5.0	желто- коричневое
IV	42	53	Реактив Фреде	1.0	1,0	синее
			1% раствор нингидрина в конц. серной кислоте	1,0	1.0	розово-вишневое, переходящее в оранжевое после проливания водой

 

Установлено, что при направленном исследовании на трамадол, или при подтверждении его наличия после предварительного обнаружения в общем скрининге, либо при исследовании на опиаты, наилучшее отделение от балластных веществ и применяемых в комбинации с трамадолом препаратов (таких, например, как триган, максиган, кетерол, димедрол, реланиум и др.) наблюдается в системе IV.

Реакция трамадола с 1% раствором нингидрина в концентрированной серной кислоте предлагается нами в качестве подтверждающей. В результате реакции наблюдается розово-вишневое окрашивание, переходящее в устойчивое оранжевое после промывания пластинки водой.

Нами изучено отношение 54 лекарственных веществ, имеющих токсикологическое значение, к 1% раствору нингидрина в концентрированной серной кислоте и установлено, что розово-вишневое окрашивание наблюдается в 15 случаях; однако устойчивое оранжевое окрашивание после обработки хроматографической пластинки водой наблюдалось лишь для трамадола и нубаина, имеющих при этом значительные различия в длине пробега в указанных выше системах растворителей.

Поскольку трамадол подвергается активному метаболизму, на хроматографической пластинке после проявления  наблюдались  дополнительно три зоны локализации, соответствующие метаболитам трамадола с Rf x 100: 12, 17, 29 (система IV, "Сорбфил"). Способы обнаружения трамадола и продуктов метаболизма аналогичны. По данным тонкослойной хроматографии площадь пятна Rf x100:  29 и трамадола сопоставимы, что подтверждается и газохроматографическими исследованиями.

Идентификация трамадола и его метаболитов по УФ-поглощению на сорбенте с флуоресцирующей добавкой ограничена невысокой чувствительностью.

1. Предложен общий и частный ТСХ-скрининг трамадола, выделенного из мочи.

2. Рекомендована реакция идентификации трамадола по характерному устойчивому окрашиванию с 1% раствором нингидрина в концентированной серной кислоте с последующим промыванием водой.