Обнаружение
11-нор-дельта-9-тетрагидроканнабинол-9-карбоновой
кислоты (ТГК кислоты) в моче методом ГХ/МС.
Приведенный метод анализа является выдержкой из статьи журнала СМЭ, 2005, №2, с.35-38.
Пробоподготовка:
Во флакон помещают 1 мл метанола, 1 мл мочи, прибавляют 50 мкл раствора внутреннего стандарта (спиртовой раствор 1 мкг/мл дельта-8-ТГК кислоты), 100 мкл 50% раствора NaOH и перемешивают. Флакон плотно укупоривают и помещают в термоблок на 10 минут при 60оС. После охлаждения, флакон вскрывают, прибавляют 6 н. раствор НCl до рН 2-3 и дважды экстрагируют смесью н-гексан-этилацетат (7:1) порциями по 5 мл каждая. Верхний слой отделяют, выпаривают до сухого остатка в токе теплого воздуха (40оС).
Дериватизация:
К сухому остатку прибавляют 180 мкл безводного диметилсульфоксида и 20 мкл 25% метанольного раствора тетраметиламмония гидроксида, перемешивают (замывая стенки флакона), через 2 минуты прибавляют 30 мкл иодистого метила и флакон выдерживают 20 минут при комнатной температуре. Далее к дериватизационной смеси прибавляют 4 мл гексана и экстрагируют 5 минут (при интенсивном перемешивании). Гексановый экстракт отделяют и упаривают до сухого остатка в токе теплого воздуха (40оС).
Исследование образца:
Сухой остаток дериватизированного образца растворяют в 75 мкл этилацетата и 3 мкл вводят в инжектор хромато-масс-спектрометра.
Условия ХМС исследования:
Газовый хроматограф НР5890А серии II с капиллярной кварцевой колонкой НР-5MS 30 м х 0,25 мм и масс-селективным детектором НР5972А (Hewlett-Packard, США); скорость газа носителя (гелий) - 1,5 мл/мин, режим работы split/splitless (деление потока 1:15, с задержкой включения 1 мин после ввода пробы). Температура инжектора 250оС, интерфейса 280оС, температура колонки программируемая: 1 минута при начальной температуре 70оС, затем нагревание колонки со скоростью 30 оС/мин до 250оС, далее прогрев колонки со скоростью 3 оС/мин до 275оС и окончательно со скоростью 15 оС/мин до 300 оС с выдержкой при конечной температуре 2 минуты. Режим работы детектора: селективный ионный мониторинг в интервале 10,3-13 минут (см. таблицу), напряжение на умножителе устанавливали на 350-450 В выше величины стандартной автоматической настройки детектора.
Таблица. Хромато-масс-спектрометрические данные.
|
Соединение |
Интервал регистрации, мин |
m/z и интенсивности регистрируемых ионов |
Время удерживания, мин |
Индекс удерживания (RI) |
||
|
ТГКВ к-та*, диметил- |
10,3-11,20 |
285 |
329 (74) |
344 (49) |
10,78 |
2573 |
|
Дельта-8-ТГК к-та**, диметил- |
11,20-13,0 |
316 |
245 (152) |
|
12,58 |
2763 |
|
ТГК к-та, диметил- |
313 |
357 (80) |
372 (49) |
12,65 |
2779 |
|
Подчеркнутые ионы использовались для количественного определения;
* ТГКВ к-та - 11-нор-дельта-9-тетрагидроканнабиварин-9-карбоновая кислота;
** Дельта-8-ТГК к-та - внутренний стандарт.
Ниже приведены хроматограммы двух образцов мочи.
Рис.1. Полная ионная хроматограмма холостого образца мочи.
Рис.2. Полная ионная хроматограмма образца мочи содержащей ТГКВ и ТГК кислоты.
Рис.3. Хроматограммы по профилю основных характеристических ионов для ТГКВ кислоты (10.78), внутреннего стандарта (12.57) и ТГК кислоты (12.65). Содержание ТГК кислоты в образце мочи 29,5 нг/мл.
Примечания: посуда для исследования силанизированная
или мытая хромовой смесью. Времена удерживания, приведенные в таблице ГХ/МС данных для соединений отличаются от
приведенных в статье.
Катаев Сергей Сергеевич
E-mail: forenschemist@narod.ru
